Ziel der Entwicklung
Da bisher keine kommerziellen ELISAs zur Quantifizierung dieses Parameters im relevanten Bereich verfügbar sind, war Ziel dieses Forschungs- und Entwicklungsprojektes einen schnellen, einfach durchführbaren und hoch spezifischen sowie sensitiven Immunoassay zum Nachweis von felinem NT proBNP aus Katzenblutproben zu entwickeln.
Vorteile und Lösungen
Der vom Herz gebildete cardiac Marker NT-proBNP wird ins Blut abgegeben. Eine Konzentrationserhöhung ist dabei einhergehend mit einer Überbelastung des Herzmuskels. Für die Diagnostik ist aktuell am Markt kein zuverlässiger ELISA Test verfügbar.
Mit dem gentechnisch hergestellten NT-proBNP sowie synthetischen Peptiden, die Teilstücke des NT-proBNP abbilden, wurden Mäuse immunisiert. Durch die natürliche Immunantwort werden antikörperproduzierende Zellen in der Maus gebildet. Durch Fusion mit einer Myelomzelllinie wurden Hybridomklone generiert und bis zur Monoklonalität vereinzelt. Die Isolation der von den monoklonalen Zellen gebildeten Antikörper aus dem Kulturmedium erfolgt mittels Affinitätschromatographie an einer spezifischen Säulenmatrix.
Mit dem NT-proBNP sowie den Antikörpern wurde ein Testsystem zur Quantifizierung im Mikrotiterplattenformat aufgebaut. Dazu wurde ein Antikörper an die Oberfläche der Mikrotiterplatte gebunden. Nach Zugabe der NT-proBNP haltigen Probe bindet der Antikörper dieses. Durch nachfolgende Zugabe eines zweiten Antikörpers, der an eine andere Stelle des NT-proBNP bindet und mit einem Enzym markiert ist, kann ein Messsignal generiert werden. Die Signalstärke ist dabei proportional zur NT-proBNP Konzentration.
Zur Bestimmung der NT-proBNP Konzentration unbekannter Proben werden die Signale mit einem mitgeführten NT-proBNP Standard, der eine definierte Konzentration besitzt, verglichen.
Zielgruppe und Zielmarkt
Der ELISA-Kit soll vorrangig veterinärmedizinischen Diagnostiklaboren, Tierärzten mit Laborkapazitäten sowie Forschungseinrichtungen angeboten werden. Durch diese Analytik kann die Diagnose von NT proBNP als Marker der hypertrophen Kardiomyopathie im eigenen Labor erfolgen. Eine Verlaufskontrolle der Medikation, die zu einer Reduktion von NT proBNP führt, kann nachfolgend ebenfalls mit dem ELISA erfolgen.
Zielgruppen für die im Projektrahmen entwickelten Antikörper und das rekombinante Antigen sind Hersteller veterinär-medizinischer Diagnostika, andere Untersuchungslabore und Forschungseinrichtungen sowie veterinärmedizinische Labore.